一本一道人人妻人人妻αv,熟妇的滚烫的肉唇翻进翻出,擦老太bbb擦bbb擦bbb擦,久久一区二区三区精华液

服務(wù)熱線

15021010459
新聞中心
當(dāng)前位置:主頁 > 新聞中心 > 神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)需要知道的幾點

神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)需要知道的幾點

更新時間:2014-10-29 點擊次數(shù):1308
神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)需要知道的幾點
一、神經(jīng)干細胞的分離和傳代
無菌條件下取新生SD大鼠(出生48h內(nèi))腦組織,D-Hanks液充分漂洗后,在解剖顯微鏡下剝離腦膜,準確分離海馬,用眼科剪將海馬剪碎后,再轉(zhuǎn)移到DMEM/F12(1:1)加B27 和bFGF(20ng/ml)的無血清培養(yǎng)基,吸管吹打機械分離制作單細胞懸液,臺盼藍染色后細胞計數(shù),調(diào)整細胞濃度為5×104~5個/ml,置于24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng),每孔加入細胞懸液500μl。待神經(jīng)球形成后再次機械分離克隆制作單細胞懸液,仍以5×104個/ml的細胞濃度置于24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng),每孔加入細胞懸液500μl。此后每7d機械分離克隆傳代1次,方法同前。
二、BrdU標(biāo)記
將BrdU溶于無血清培養(yǎng)基,過濾除菌后加入神經(jīng)球形成后再次機械分離克隆制作的單細胞懸液中(BrdU終濃度為5μmol/L),培養(yǎng)7d待新的神經(jīng)球形成后,將神經(jīng)球轉(zhuǎn)移到預(yù)先涂布有多聚賴氨酸的培養(yǎng)板中,貼壁2h行BrdU免疫細胞化學(xué)染色。
三、神經(jīng)干細胞的誘導(dǎo)分化
選取部分上述傳代后形成的次代神經(jīng)球種植于預(yù)先涂布有多聚賴氨酸的24孔培養(yǎng)板中,并加入有血清培養(yǎng)基(含10%胎牛血清的DMEM/F12),一部分神經(jīng)球于貼壁2h后行Nestin免疫細胞化學(xué)染色,另一部分神經(jīng)球繼續(xù)培養(yǎng),觀察其生長分化情況。另將一部分次代神經(jīng)球機械分離制成單細胞懸液后加入有血清培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng),7d后分別行Tuj1 、GFAP 、Galc 免疫細胞化學(xué)染色。
四、條件培養(yǎng)液的制備
取1g雞胚的后肢骨骼肌組織,加入9mlD-Hanks液中冰浴勻漿15min,離心獲得上清液,過濾除菌后,加兩倍體積DMEM/F12培養(yǎng)基制成條件培養(yǎng)液備用。
五、神經(jīng)干細胞的定向誘導(dǎo)分化
將一部分次代神經(jīng)球機械分離制成單細胞懸液后分別加入條件培養(yǎng)液和有血清培養(yǎng)基(含10%胎牛血清的DMEM/F12)中對照貼壁培養(yǎng),7d后均行ChAT免疫細胞化學(xué)染色。
六、免疫細胞化學(xué)染色
培養(yǎng)細胞用4%多聚甲醛固定30min后,PBS充分漂洗,然后按ABC法分別行鼠抗Nestin,鼠抗Tuj1,兔抗GFAP,鼠抗Galc,鼠抗Brdu免疫細胞化學(xué)染色,用DAB和H2O2作為呈色劑,陽性著色為棕黃色。
更多關(guān)于神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基的知識咨詢。

2025 版權(quán)所有 © 重慶市華雅干細胞技術(shù)有限公司  備案號:渝ICP備14000349號-4 sitemap.xml 管理登陸 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)

地址:重慶市江北區(qū)金渝大道153號8棟20-14 傳真:023-63419626 郵件:sales@ys-bio.com

重慶市華雅干細胞技術(shù)有限公司主要經(jīng)營干細胞研究 干細胞治療產(chǎn)品 生物試劑 實驗耗材 藥物研發(fā)等產(chǎn)品。

關(guān)注我們

服務(wù)熱線

400-021-2200

掃一掃,關(guān)注我們

宁柔柔的小泬撑开到极致| 人体内射精一区二区三区| 男人放进女人阳道入口多深算正常| 国产精品久久久久精品艾秋| 亚洲av无一区二区三区| 最近国语视频在线观看免费播放| 米奇7777狠狠狠狠视频| 无限资源在线观看片中文在线| 办公室玩弄娇喘秘书在线观看| 白洁少妇高义全文阅读| 用舌头去添女人下面是不是真爱| 大肉蒂被嘬的好爽h| 亚洲精品国产精品| 免费看曰批女人爽的视频| 丰满老熟好大bbbbbb| 老bwbwbwbwbwbwbw| 亚洲色久悠悠av在线观看| 亚洲爆乳无码一区二区三区| 中文精品久久久久人妻不卡| 少妇的诱惑| 巴西大屁股妓女bbw| 欧美《熟妇的荡欲》在线观看| 午夜无码熟熟妇丰满人妻| 无码人妻一区二区三区免费n鬼沢 美女露100%双奶头无遮挡 | 久久精品无码一区二区日韩av | 青青草原精品99久久精品66| 清冷医生h打开腿乖听话| 欧美性猛交xxxx乱大交| 高潮aaa人人爽人人爱| 亚洲欧美日本| 色偷拍 自怕 亚洲 30p| 久久久无码精品亚洲日韩按摩| 评书三国演义袁阔成播讲365集| 波多野结衣电影在线观看| 亚洲 欧洲 日产国码| 女人下边被添全过视频| 国产婷婷色一区二区三区在线| 和50岁熟妇做了四次| 晚上想看点小片片| 美女扒开大腿让男人桶| 永久黄网站色视频免费直播|