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關(guān)于細(xì)胞凍存液的使用說明介紹

更新時間:2014-12-09 點擊次數(shù):1888
   細(xì)胞凍存液是細(xì)胞保存的主要方法之一,是利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外,細(xì)胞凍存液還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細(xì)胞。 細(xì)胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結(jié)條件下,細(xì)胞內(nèi)水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細(xì)胞損傷。 細(xì)胞凍存液采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min,當(dāng)溫度低于-25℃時可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。
  細(xì)胞凍存液的使用說明介紹:
  1、消化細(xì)胞,將細(xì)胞懸液收集至離心管中。
  2、1000rpm離心10分鐘,棄上清液。
  3、沉淀加細(xì)胞凍存液,輕輕吹打均勻,計數(shù),調(diào)整至5*106/ml左右。
  4、將懸液分至凍存管中,每管1 ml。
  5、將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口,封口一定要嚴(yán),否則復(fù)蘇時易出現(xiàn)爆裂。
  6、貼上標(biāo)簽,寫明細(xì)胞種類,凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩。
  7、按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-30℃ 1小時)→氣態(tài)氮(30分鐘)→液氮。
  注意:操作時應(yīng)小心,以免液氮凍傷。液氮定期檢查,隨時補充,不能揮發(fā)干凈,一般30立升的液氮能用1~1.5月。
  細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。此細(xì)胞凍存液主要是由胎牛血清和細(xì)胞培養(yǎng)級DMSO混合而成,適合于大多數(shù)細(xì)胞的凍存,其凍存方法與常規(guī)方法相同。在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時,細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶,能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑,可使冰點降低。在緩慢的凍結(jié)條件下,能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細(xì)胞復(fù)蘇時速度要快,使之迅速通過細(xì)胞zui易受損的-5~0℃,細(xì)胞仍能生長,活力受損不大。

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